Javascript ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ ਤੁਹਾਡੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਵਿੱਚ ਅਯੋਗ ਹੈ।ਜਦੋਂ ਜਾਵਾਸਕ੍ਰਿਪਟ ਅਯੋਗ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਸ ਵੈੱਬਸਾਈਟ ਦੇ ਕੁਝ ਫੰਕਸ਼ਨ ਕੰਮ ਨਹੀਂ ਕਰਨਗੇ।
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgenia Ranneva, Philippe Deprez Department of Science, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Spain * ਇਹਨਾਂ ਲੇਖਕਾਂ ਕੋਲ ਇਸ ਕੰਮ ਦੇ ਬਰਾਬਰ ਕੁਝ ਸਮਝ ਹੈ। ਯੋਗਦਾਨ ਦੀ ਪਿੱਠਭੂਮੀ: Hyaluronic ਐਸਿਡ (HA) ਇੱਕ ਕੁਦਰਤੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਹੋਣ ਵਾਲਾ ਪੋਲੀਸੈਕਰਾਈਡ ਹੈ ਜੋ ਸੁਹਜ ਦੇ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਲਈ ਡਰਮਲ ਫਿਲਰਾਂ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਕਿਉਂਕਿ ਮਨੁੱਖੀ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਇਸਦਾ ਅੱਧਾ ਜੀਵਨ ਕਈ ਦਿਨਾਂ ਦਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ HA- ਅਧਾਰਤ ਡਰਮਲ ਫਿਲਰ ਸਰੀਰ ਵਿੱਚ ਆਪਣੀ ਉਮਰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਰਸਾਇਣਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੋਧੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਵਪਾਰਕ HA- ਅਧਾਰਤ ਫਿਲਰਾਂ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਸੋਧ 1,4-ਬਿਊਟਾਨੇਡੀਓਲ ਡਿਗਲਾਈਸੀਡਿਲ ਈਥਰ (ਬੀਡੀਡੀਈ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ HA ਚੇਨਾਂ ਨੂੰ ਕਰਾਸਲਿੰਕ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਕਰਾਸਲਿੰਕਿੰਗ ਏਜੰਟ ਵਜੋਂ ਹੈ।ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਜਾਂ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਨਾ ਕੀਤੇ BDDE ਨੂੰ <2 ਹਿੱਸੇ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿਲੀਅਨ (ppm) 'ਤੇ ਗੈਰ-ਜ਼ਹਿਰੀਲੀ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ;ਇਸ ਲਈ, ਮਰੀਜ਼ ਦੀ ਸੁਰੱਖਿਆ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਅੰਤਮ ਡਰਮਲ ਫਿਲਰ ਵਿੱਚ ਬਾਕੀ ਬਚੇ ਬੀਡੀਡੀਈ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਜਾਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਵਿਧੀਆਂ: ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਅਤੇ ਮਾਸ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ (LC-MS) ਨੂੰ ਮਿਲਾ ਕੇ ਖਾਰੀ ਸਥਿਤੀਆਂ ਅਧੀਨ BDDE ਅਤੇ HA ਵਿਚਕਾਰ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਉਪ-ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਖੋਜ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦਾ ਵਰਣਨ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਨਤੀਜੇ: ਵੱਖ-ਵੱਖ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਂ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇਹ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਕਿ HA-BDDE ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਨੂੰ ਰੋਗਾਣੂ ਮੁਕਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਖਾਰੀ ਸਥਿਤੀਆਂ ਅਤੇ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ ਨੇ ਇਸ ਨਵੇਂ ਉਪ-ਉਤਪਾਦ, "ਪ੍ਰੋਪਲੀਨ ਗਲਾਈਕੋਲ-ਵਰਗੇ" ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੇ ਗਠਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕੀਤਾ।LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ ਕਿ ਉਪ-ਉਤਪਾਦ ਵਿੱਚ BDDE ਦੇ ਸਮਾਨ ਮੋਨੋਇਸੋਟੋਪਿਕ ਪੁੰਜ, ਇੱਕ ਵੱਖਰਾ ਧਾਰਨ ਸਮਾਂ (tR), ਅਤੇ ਇੱਕ ਵੱਖਰਾ UV ਸਮਾਈ (λ=200 nm) ਮੋਡ ਹੈ।BDDE ਦੇ ਉਲਟ, ਇਹ LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਕਿ ਉਸੇ ਮਾਪ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ, ਇਸ ਉਪ-ਉਤਪਾਦ ਦੀ 200 nm 'ਤੇ ਉੱਚ ਖੋਜ ਦਰ ਹੈ।ਸਿੱਟਾ: ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਇਸ ਨਵੇਂ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਬਣਤਰ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਈਪੋਕਸਾਈਡ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਵਪਾਰਕ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਲਈ HA-BDDE ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ (HA ਡਰਮਲ ਫਿਲਰ) ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਵਿੱਚ ਪਾਏ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਇਸ ਨਵੇਂ ਉਪ-ਉਤਪਾਦ ਦੇ ਜੋਖਮ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਚਰਚਾ ਖੁੱਲੀ ਹੈ।ਕੀਵਰਡਸ: ਹਾਈਲੂਰੋਨਿਕ ਐਸਿਡ, ਐਚਏ ਡਰਮਲ ਫਿਲਰ, ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ ਹਾਈਲੂਰੋਨਿਕ ਐਸਿਡ, ਬੀਡੀਡੀਈ, ਐਲਸੀ-ਐਮਐਸ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ, ਬੀਡੀਡੀਈ ਉਪ-ਉਤਪਾਦ।
ਹਾਈਲੂਰੋਨਿਕ ਐਸਿਡ (HA) 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਫਿਲਰ ਕਾਸਮੈਟਿਕ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਅਤੇ ਪ੍ਰਸਿੱਧ ਡਰਮਲ ਫਿਲਰ ਹਨ।1 ਇਹ ਡਰਮਲ ਫਿਲਰ ਇੱਕ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਹੈ, ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ >95% ਪਾਣੀ ਅਤੇ 0.5-3% HA ਨਾਲ ਬਣਿਆ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਜੈੱਲ ਵਰਗੀ ਬਣਤਰ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।2 HA ਇੱਕ ਪੋਲੀਸੈਕਰਾਈਡ ਹੈ ਅਤੇ ਰੀੜ੍ਹ ਦੀ ਹੱਡੀ ਦੇ ਬਾਹਰਲੇ ਸੈੱਲ ਮੈਟਰਿਕਸ ਦਾ ਮੁੱਖ ਹਿੱਸਾ ਹੈ।ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਇੱਕ.ਇਸ ਵਿੱਚ (1,4)-ਗਲੂਕੁਰੋਨਿਕ ਐਸਿਡ-β (1,3)-N-ਐਸੀਟਿਲਗਲੂਕੋਸਾਮਾਈਨ (GlcNAc) ਦੁਹਰਾਉਣ ਵਾਲੇ ਡਿਸਕਚਾਰਾਈਡ ਯੂਨਿਟਸ ਗਲਾਈਕੋਸੀਡਿਕ ਬਾਂਡ ਦੁਆਰਾ ਜੁੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਇਹ ਡਿਸਕਚਾਰਾਈਡ ਪੈਟਰਨ ਸਾਰੇ ਜੀਵਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕੋ ਜਿਹਾ ਹੈ।ਕੁਝ ਪ੍ਰੋਟੀਨ-ਆਧਾਰਿਤ ਫਿਲਰਾਂ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਕੋਲੇਜਨ) ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ, ਇਹ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ HA ਨੂੰ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਹੀ ਬਾਇਓ-ਅਨੁਕੂਲ ਅਣੂ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ।ਇਹ ਫਿਲਰ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਕ੍ਰਮ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ ਜੋ ਮਰੀਜ਼ ਦੀ ਇਮਿਊਨ ਸਿਸਟਮ ਦੁਆਰਾ ਪਛਾਣਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਜਦੋਂ ਇੱਕ ਡਰਮਲ ਫਿਲਰ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ HA ਦੀ ਮੁੱਖ ਸੀਮਾ ਹਾਈਲੂਰੋਨੀਡੇਸ ਨਾਮਕ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੇ ਇੱਕ ਖਾਸ ਪਰਿਵਾਰ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੇ ਕਾਰਨ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੇ ਅੰਦਰ ਇਸਦਾ ਤੇਜ਼ ਟਰਨਓਵਰ ਹੈ।ਹੁਣ ਤੱਕ, ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ HA ਦੇ ਅੱਧੇ ਜੀਵਨ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ HA ਬਣਤਰ ਵਿੱਚ ਕਈ ਰਸਾਇਣਕ ਸੋਧਾਂ ਦਾ ਵਰਣਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।3 ਇਹਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਸੋਧਾਂ HA ਚੇਨਾਂ ਨੂੰ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਕਰਕੇ ਪੋਲੀਸੈਕਰਾਈਡ ਪੋਲੀਮਰਾਂ ਤੱਕ ਹਾਈਲੂਰੋਨੀਡੇਜ਼ ਦੀ ਪਹੁੰਚ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ।ਇਸਲਈ, HA ਬਣਤਰ ਅਤੇ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਏਜੰਟ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਪੁਲਾਂ ਅਤੇ ਇੰਟਰਮੋਲੀਕਿਊਲਰ ਕੋਵਲੈਂਟ ਬਾਂਡਾਂ ਦੇ ਗਠਨ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਕੁਦਰਤੀ HA ਨਾਲੋਂ ਜ਼ਿਆਦਾ ਐਂਟੀ-ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ।4-6
ਹੁਣ ਤੱਕ, ਕ੍ਰਾਸਲਿੰਕਡ HA ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਰਸਾਇਣਕ ਕਰਾਸਲਿੰਕਿੰਗ ਏਜੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ ਮੇਥਾਕਰੀਲਾਮਾਈਡ, 7 ਹਾਈਡ੍ਰਾਈਜ਼ਾਈਡ, 8 ਕਾਰਬੋਡਾਈਮਾਈਡ, 9 ਡਿਵਿਨਾਇਲ ਸਲਫੋਨ, 1,4-ਬਿਊਟਾਨੇਡੀਓਲ ਡਿਗਲਾਈਸੀਡਿਲ ਈਥਰ (ਬੀਡੀਡੀਈ) ਅਤੇ ਪੌਲੀ (ਈਥੀਲੀਨ ਗਲਾਈਕੋਲ) ਡਾਈਗਲਾਈਸੀਡਿਲ ਈਥਰ।10,11 BDDE ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਕਰਾਸਲਿੰਕਿੰਗ ਏਜੰਟ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਸ ਕਿਸਮ ਦੇ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਲ ਦਹਾਕਿਆਂ ਤੋਂ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਸਾਬਤ ਹੋਏ ਹਨ, ਵਰਤੇ ਗਏ ਕਰਾਸਲਿੰਕਿੰਗ ਏਜੰਟ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਰੀਐਜੈਂਟ ਹਨ ਜੋ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਕ ਅਤੇ, ਕੁਝ ਮਾਮਲਿਆਂ ਵਿੱਚ, ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ।12 ਇਸ ਲਈ, ਅੰਤਮ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਵਿੱਚ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਬਚੀ ਹੋਈ ਸਮੱਗਰੀ ਉੱਚੀ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।BDDE ਨੂੰ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਬਕਾਇਆ ਇਕਾਗਰਤਾ 2 ਹਿੱਸੇ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿਲੀਅਨ (ppm) ਤੋਂ ਘੱਟ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।4
ਘੱਟ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ BDDE ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ, ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਡਿਗਰੀ ਅਤੇ HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਲ ਵਿੱਚ ਬਦਲੀ ਸਥਿਤੀ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਦੇ ਕਈ ਤਰੀਕੇ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਗੈਸ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ, ਮਾਸ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ (MS), ਨਿਊਕਲੀਅਰ ਮੈਗਨੈਟਿਕ ਰੈਜ਼ੋਨੈਂਸ (NMR) ਫਲੋਰਸੈਂਸ ਮਾਪ ਵਿਧੀਆਂ, ਅਤੇ ਡਾਇਓਡ ਐਰੇ ਕਪਲਡ ਹਾਈ ਪਰਫਾਰਮੈਂਸ ਲਿਕਵਿਡ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ (HPLC)।13-17 ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਖਾਰੀ ਸਥਿਤੀਆਂ ਅਧੀਨ ਬੀਡੀਡੀਈ ਅਤੇ HA ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੁਆਰਾ ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ ਅੰਤਮ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਉਪ-ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਖੋਜ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦਾ ਵਰਣਨ ਕਰਦਾ ਹੈ।HPLC ਅਤੇ ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ-ਮਾਸ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ (LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ)।ਕਿਉਂਕਿ BDDE ਦੇ ਇਸ ਉਪ-ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਜ਼ਹਿਰੀਲੀਤਾ ਅਣਜਾਣ ਹੈ, ਅਸੀਂ ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਇਸਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਉਸੇ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅੰਤਿਮ ਉਤਪਾਦ ਵਿੱਚ BDDE 'ਤੇ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japan) ਦੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਸੋਡੀਅਮ ਲੂਣ ਦਾ ਅਣੂ ਭਾਰ ~1,368,000 Da (Laurent ਵਿਧੀ) 18 ਹੈ ਅਤੇ ਅੰਦਰੂਨੀ ਲੇਸਦਾਰਤਾ 2.20 m3/kg ਹੈ।ਕਰਾਸਲਿੰਕਿੰਗ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਲਈ, BDDE (≥95%) ਨੂੰ ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ ਕੰਪਨੀ (ਸੇਂਟ ਲੁਈਸ, MO, USA) ਤੋਂ ਖਰੀਦਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।pH 7.4 ਵਾਲਾ ਫਾਸਫੇਟ ਬਫਰਡ ਖਾਰਾ ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ ਕੰਪਨੀ ਤੋਂ ਖਰੀਦਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਗਏ ਸਾਰੇ ਘੋਲਨ ਵਾਲੇ, ਐਸੀਟੋਨਿਟ੍ਰਾਈਲ ਅਤੇ ਪਾਣੀ HPLC ਗ੍ਰੇਡ ਕੁਆਲਿਟੀ ਤੋਂ ਖਰੀਦੇ ਗਏ ਸਨ।ਫਾਰਮਿਕ ਐਸਿਡ (98%) ਰੀਏਜੈਂਟ ਗ੍ਰੇਡ ਵਜੋਂ ਖਰੀਦਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਸਾਰੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਇੱਕ UPLC ਐਕਵਿਟੀ ਸਿਸਟਮ (ਵਾਟਰਸ, ਮਿਲਫੋਰਡ, MA, USA) 'ਤੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ ਇੱਕ ਏਪੀਆਈ 3000 ਟ੍ਰਿਪਲ ਕਵਾਡਰੂਪੋਲ ਮਾਸ ਸਪੈਕਟਰੋਮੀਟਰ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਸਨ ਜੋ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਪ੍ਰੇ ਆਇਓਨਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਸਰੋਤ (AB SCIEX, Framingham, MA, USA) ਨਾਲ ਲੈਸ ਸਨ।
1% ਅਲਕਲੀ (ਸੋਡੀਅਮ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਡ, NaOH) ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਇੱਕ 10% (w/w) ਸੋਡੀਅਮ ਹਾਈਲੂਰੋਨੇਟ (NaHA) ਘੋਲ ਵਿੱਚ 198 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਬੀਡੀਡੀਈ ਨੂੰ ਜੋੜ ਕੇ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਲ ਦਾ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਸ਼ੁਰੂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਿੱਚ ਅੰਤਮ BDDE ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 9.9 mg/mL (0.049 mM) ਸੀ।ਫਿਰ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਇਕਸਾਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 45 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਅੱਗੇ ਵਧਣ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ।19 ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦਾ pH ~12 'ਤੇ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ, ਅਤੇ ਅੰਤਮ HA-BDDE ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਨੂੰ 10 ਤੋਂ 25 mg/mL ਦੀ HA ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ, ਅਤੇ 7.4 ਦਾ ਅੰਤਮ pH ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ PBS ਬਫਰ ਨਾਲ ਫਿਲਟਰ ਅਤੇ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਪੈਦਾ ਹੋਏ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਲ ਨੂੰ ਨਿਰਜੀਵ ਕਰਨ ਲਈ, ਇਹ ਸਾਰੇ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਆਟੋਕਲੇਵਡ ਹੁੰਦੇ ਹਨ (20 ਮਿੰਟ ਲਈ 120°C)।ਸ਼ੁੱਧ BDDE-HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਨੂੰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਤੱਕ 4°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਉਤਪਾਦ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ BDDE ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ, ਇੱਕ 240 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਤੋਲਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਸੈਂਟਰ ਹੋਲ ਵਿੱਚ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; ਵਾਲੀਅਮ 0.5 mL) ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 10,000 rpm 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। 10 ਮਿੰਟ।ਕੁੱਲ 20 µL ਪੁੱਲ-ਡਾਊਨ ਤਰਲ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
ਖਾਰੀ ਸਥਿਤੀਆਂ (1%, 0.1% ਅਤੇ 0.01% NaOH) ਦੇ ਅਧੀਨ BDDE ਮਿਆਰ (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ ਕੋ) ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ, ਜੇ ਹੇਠ ਲਿਖੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ ਪੂਰੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ, ਤਾਂ ਤਰਲ ਨਮੂਨਾ 1:10, 1:100, ਜਾਂ ਵੱਧ ਹੈ 1:1,000,000 ਜੇ ਜਰੂਰੀ ਹੋਵੇ, ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਮਿਲਿਕਯੂ ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।
ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ (HA 2%, H2O, 1% NaOH, ਅਤੇ 0.049 mM BDDE) ਵਿੱਚ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਣ ਵਾਲੀਆਂ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਮੱਗਰੀਆਂ ਲਈ, ਇਹਨਾਂ ਸਮੱਗਰੀਆਂ ਤੋਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਦੇ 1 ਮਿ.ਲੀ. ਨੂੰ ਇੱਕੋ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਹਾਲਤਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਆਇਨ ਨਕਸ਼ੇ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਈ ਦੇਣ ਵਾਲੀਆਂ ਚੋਟੀਆਂ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ, 20 μL ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ 10 ppb BDDE ਸਟੈਂਡਰਡ ਹੱਲ (Sigma-Aldrich Co) ਦਾ 10 µL ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਸ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ, ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਸਟੈਂਡਰਡ ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 37 ਪੀਪੀਬੀ ਹੈ।
ਪਹਿਲਾਂ, 10 μL ਸਟੈਂਡਰਡ BDDE (Sigma-Aldrich Co) ਨੂੰ 990 μL MilliQ ਪਾਣੀ (ਘਣਤਾ 1.1 g/mL) ਨਾਲ ਪਤਲਾ ਕਰਕੇ 11,000 mg/L (11,000 ppm) ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ BDDE ਸਟਾਕ ਘੋਲ ਤਿਆਰ ਕਰੋ।ਇਸ ਘੋਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ 110 µg/L (110 ppb) BDDE ਘੋਲ ਨੂੰ ਇੱਕ ਵਿਚਕਾਰਲੇ ਮਿਆਰੀ ਪਤਲੇ ਵਜੋਂ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਕਰੋ।ਫਿਰ, 75, 50, 25, 10, ਅਤੇ 1 ਪੀਪੀਬੀ ਦੀ ਲੋੜੀਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਇੰਟਰਮੀਡੀਏਟ ਡਾਇਲੁਐਂਟ ਨੂੰ ਕਈ ਵਾਰ ਪਤਲਾ ਕਰਕੇ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਇੰਟਰਮੀਡੀਏਟ ਬੀਡੀਡੀਈ ਸਟੈਂਡਰਡ ਡਾਇਲੁਐਂਟ (110 ਪੀਪੀਬੀ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਚਿੱਤਰ 1 ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਇਹ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿ 1.1 ਤੋਂ 110 ppb ਤੱਕ BDDE ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਵਿੱਚ ਚੰਗੀ ਰੇਖਿਕਤਾ (R2>0.99) ਹੈ।ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਨੂੰ ਚਾਰ ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਦੁਹਰਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਚਿੱਤਰ 1 LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ BDDE ਸਟੈਂਡਰਡ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਕਰਵ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਚੰਗਾ ਸਬੰਧ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਹੈ (R2>0.99)।
ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ: BDDE, 1,4-ਬਿਊਟਾਨੇਡੀਓਲ ਡਿਗਲਾਈਸੀਡਾਇਲ ਈਥਰ;LC-MS, ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਅਤੇ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ।
ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ BDDE ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਅਤੇ ਅਧਾਰ ਹੱਲ ਵਿੱਚ BDDE ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ, LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫਿਕ ਵਿਭਾਜਨ LUNA 2.5 µm C18(2)-HST ਕਾਲਮ (50×2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) 'ਤੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੌਰਾਨ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (25°C) 'ਤੇ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਮੋਬਾਈਲ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਐਸੀਟੋਨਾਈਟ੍ਰਾਇਲ (ਘੋਲਨ ਵਾਲਾ ਏ) ਅਤੇ ਪਾਣੀ (ਘੋਲਨ ਵਾਲਾ ਬੀ) ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 0.1% ਫਾਰਮਿਕ ਐਸਿਡ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਮੋਬਾਈਲ ਪੜਾਅ ਗਰੇਡੀਐਂਟ ਇਲੂਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਅਲੋਪ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਗਰੇਡੀਐਂਟ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹੈ: 0 ਮਿੰਟ, 2% ਏ;1 ਮਿੰਟ, 2% ਏ;6 ਮਿੰਟ, 98% ਏ;7 ਮਿੰਟ, 98% ਏ;7.1 ਮਿੰਟ, 2% ਏ;10 ਮਿੰਟ, 2% A. ਚੱਲਣ ਦਾ ਸਮਾਂ 10 ਮਿੰਟ ਹੈ ਅਤੇ ਟੀਕੇ ਦੀ ਮਾਤਰਾ 20 μL ਹੈ।BDDE ਦਾ ਧਾਰਨ ਸਮਾਂ ਲਗਭਗ 3.48 ਮਿੰਟ ਹੈ (ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ 3.43 ਤੋਂ 4.14 ਮਿੰਟ ਤੱਕ)।ਮੋਬਾਈਲ ਪੜਾਅ ਨੂੰ LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ 0.25 mL/min ਦੀ ਪ੍ਰਵਾਹ ਦਰ 'ਤੇ ਪੰਪ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
MS ਦੁਆਰਾ BDDE ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਨ ਲਈ, UPLC ਸਿਸਟਮ (ਵਾਟਰਸ) ਨੂੰ ਇੱਕ ਏਪੀਆਈ 3000 ਟ੍ਰਿਪਲ ਕਵਾਡ੍ਰਪੋਲ ਮਾਸ ਸਪੈਕਟਰੋਮੀਟਰ (AB SCIEX) ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਹੈ ਜੋ ਇੱਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਪ੍ਰੇ ਆਇਓਨਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਸਰੋਤ ਨਾਲ ਲੈਸ ਹੈ, ਅਤੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਆਇਨ ਮੋਡ (ESI+) ਵਿੱਚ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
BDDE 'ਤੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਆਇਨ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਤੀਬਰਤਾ ਵਾਲਾ ਟੁਕੜਾ 129.1 Da (ਚਿੱਤਰ 6) ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਟੁਕੜਾ ਹੋਣ ਲਈ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਸਲਈ, ਗਣਨਾ ਲਈ ਮਲਟੀ-ਆਇਨ ਮਾਨੀਟਰਿੰਗ ਮੋਡ (MIM) ਵਿੱਚ, BDDE ਦਾ ਪੁੰਜ ਪਰਿਵਰਤਨ (ਮਾਸ-ਟੂ-ਚਾਰਜ ਅਨੁਪਾਤ [m/z]) 203.3/129.1 Da ਹੈ।ਇਹ LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਫੁੱਲ ਸਕੈਨ (FS) ਮੋਡ ਅਤੇ ਉਤਪਾਦ ਆਇਨ ਸਕੈਨ (PIS) ਮੋਡ ਦੀ ਵੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਨ ਲਈ, ਇੱਕ ਖਾਲੀ ਨਮੂਨਾ (ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਮੋਬਾਈਲ ਪੜਾਅ) ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।203.3/129.1 Da ਦੇ ਪੁੰਜ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੇ ਨਾਲ ਖਾਲੀ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਸੰਕੇਤ ਨਹੀਂ ਮਿਲਿਆ।ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੀ ਦੁਹਰਾਉਣਯੋਗਤਾ ਦੇ ਸੰਬੰਧ ਵਿੱਚ, 55 ਪੀਪੀਬੀ (ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਕਰਵ ਦੇ ਮੱਧ ਵਿੱਚ) ਦੇ 10 ਸਟੈਂਡਰਡ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਇੱਕ ਬਕਾਇਆ ਸਟੈਂਡਰਡ ਡਿਵੀਏਸ਼ਨ (RSD) <5% (ਡਾਟਾ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ)।
ਬਾਕੀ ਰਹਿੰਦੇ BDDE ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਚਾਰ ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਅੱਠ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਆਟੋਕਲੇਵਡ BDDE ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲਸ ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਜਿਵੇਂ ਕਿ "ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਢੰਗ" ਭਾਗ ਵਿੱਚ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਮਾਤਰਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ BDDE ਸਟੈਂਡਰਡ ਡਿਲਿਊਸ਼ਨ ਦੇ ਰਿਗਰੈਸ਼ਨ ਕਰਵ ਦੇ ਔਸਤ ਮੁੱਲ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ 203.3/129.1 Da ਦੇ BDDE ਪੁੰਜ ਪਰਿਵਰਤਨ 'ਤੇ ਖੋਜੀ ਗਈ ਵਿਲੱਖਣ ਸਿਖਰ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ ਧਾਰਨ ਦੇ ਨਾਲ। 3.43 ਤੋਂ 4.14 ਮਿੰਟ ਦਾ ਸਮਾਂ ਉਡੀਕ ਨਹੀਂ।ਚਿੱਤਰ 2 10 ppb BDDE ਸੰਦਰਭ ਮਿਆਰ ਦਾ ਇੱਕ ਉਦਾਹਰਨ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗਰਾਮ ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਸਾਰਣੀ 1 ਅੱਠ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਲਾਂ ਦੀ ਬਾਕੀ ਬਚੀ BDDE ਸਮੱਗਰੀ ਦਾ ਸਾਰ ਦਿੰਦੀ ਹੈ।ਮੁੱਲ ਰੇਂਜ 1 ਤੋਂ 2.46 ਪੀਪੀਬੀ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਬਕਾਇਆ BDDE ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਮਨੁੱਖੀ ਵਰਤੋਂ (<2 ppm) ਲਈ ਸਵੀਕਾਰਯੋਗ ਹੈ।
203.30/129.10 Da (ਸਕਾਰਾਤਮਕ MRM ਮੋਡ ਵਿੱਚ) ਦੇ LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ 10 ppb BDDE ਸੰਦਰਭ ਸਟੈਂਡਰਡ (Sigma-Aldrich Co), MS (m/z) ਪਰਿਵਰਤਨ ਦਾ ਚਿੱਤਰ 2 ਆਇਨ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗਰਾਮ।
ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ: BDDE, 1,4-ਬਿਊਟਾਨੇਡੀਓਲ ਡਿਗਲਾਈਸੀਡਾਇਲ ਈਥਰ;LC-MS, ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਅਤੇ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ;MRM, ਮਲਟੀਪਲ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਨਿਗਰਾਨੀ;MS, ਪੁੰਜ;m/z, ਪੁੰਜ-ਤੋਂ-ਚਾਰਜ ਅਨੁਪਾਤ।
ਨੋਟ: ਨਮੂਨੇ 1-8 ਆਟੋਕਲੇਵਡ BDDE ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਹਨ।ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਵਿੱਚ ਬੀਡੀਡੀਈ ਦੀ ਬਕਾਇਆ ਮਾਤਰਾ ਅਤੇ ਬੀਡੀਡੀਈ ਧਾਰਨ ਸਮੇਂ ਦੀ ਸਿਖਰ ਵੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ।ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਵੱਖ ਵੱਖ ਧਾਰਨ ਸਮਿਆਂ ਦੇ ਨਾਲ ਨਵੀਆਂ ਸਿਖਰਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੀ ਵੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ: BDDE, 1,4-ਬਿਊਟਾਨੇਡੀਓਲ ਡਿਗਲਾਈਸੀਡਾਇਲ ਈਥਰ;HA, hyaluronic ਐਸਿਡ;MRM, ਮਲਟੀਪਲ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਨਿਗਰਾਨੀ;tR, ਧਾਰਨ ਦਾ ਸਮਾਂ;LC-MS, ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਅਤੇ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ;RRT, ਰਿਸ਼ਤੇਦਾਰ ਧਾਰਨ ਸਮਾਂ।
ਹੈਰਾਨੀ ਦੀ ਗੱਲ ਹੈ ਕਿ, LC-MS ਆਇਨ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਮ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਾਰੇ ਆਟੋਕਲੇਵਡ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ, 2.73 ਤੋਂ 3.29 ਮਿੰਟ ਦੇ ਛੋਟੇ ਧਾਰਨਾ ਸਮੇਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਵਾਧੂ ਸਿਖਰ ਸੀ।ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਚਿੱਤਰ 3 ਇੱਕ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਆਇਨ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਮ ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ ਇੱਕ ਵਾਧੂ ਸਿਖਰ ਲਗਭਗ 2.71 ਮਿੰਟਾਂ ਦੇ ਇੱਕ ਵੱਖਰੇ ਧਾਰਨ ਸਮੇਂ ਤੇ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।BDDE ਤੋਂ ਨਵੀਂ ਦੇਖੀ ਗਈ ਸਿਖਰ ਅਤੇ ਸਿਖਰ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਨਿਰੀਖਣ ਕੀਤਾ ਰਿਟੇਨਸ਼ਨ ਟਾਈਮ (RRT) 0.79 (ਸਾਰਣੀ 1) ਪਾਇਆ ਗਿਆ।ਕਿਉਂਕਿ ਅਸੀਂ ਜਾਣਦੇ ਹਾਂ ਕਿ LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਗਏ C18 ਕਾਲਮ ਵਿੱਚ ਨਵੀਂ ਦੇਖੀ ਗਈ ਚੋਟੀ ਨੂੰ ਘੱਟ ਬਰਕਰਾਰ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਨਵੀਂ ਸਿਖਰ BDDE ਨਾਲੋਂ ਵਧੇਰੇ ਧਰੁਵੀ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦੀ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।
LC-MS (MRM ਪੁੰਜ ਪਰਿਵਰਤਨ 203.3/129.0 Da) ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਚਿੱਤਰ 3 ਆਇਨ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗਰਾਮ।
ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ: HA, hyaluronic ਐਸਿਡ;LC-MS, ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਅਤੇ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ;MRM, ਮਲਟੀਪਲ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਨਿਗਰਾਨੀ;RRT, ਰਿਸ਼ਤੇਦਾਰ ਧਾਰਨ ਸਮਾਂ;tR, ਧਾਰਨ ਦਾ ਸਮਾਂ।
ਇਸ ਸੰਭਾਵਨਾ ਨੂੰ ਨਕਾਰਨ ਲਈ ਕਿ ਵੇਖੀਆਂ ਗਈਆਂ ਨਵੀਆਂ ਚੋਟੀਆਂ ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਗਏ ਕੱਚੇ ਮਾਲ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਗੰਦਗੀ ਹੋ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ, ਇਹਨਾਂ ਕੱਚੇ ਮਾਲ ਦਾ ਵੀ ਉਸੇ LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਮੱਗਰੀ ਵਿੱਚ ਪਾਣੀ, ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ 2% NaHA, ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ 1% NaOH, ਅਤੇ ਬੀਡੀਡੀਈ ਉਸੇ ਹੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ ਜੋ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਵਰਤੀ ਗਈ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਆਇਨ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਮ ਨੇ ਕੋਈ ਮਿਸ਼ਰਣ ਜਾਂ ਸਿਖਰ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ, ਅਤੇ ਇਸਦਾ ਧਾਰਨ ਸਮਾਂ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਨਵੀਂ ਸਿਖਰ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਤੱਥ ਇਸ ਵਿਚਾਰ ਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਨਾ ਸਿਰਫ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਮੱਗਰੀ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਵੀ ਮਿਸ਼ਰਣ ਜਾਂ ਪਦਾਰਥ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ ਜੋ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਦਖਲ ਦੇ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਪਰ ਹੋਰ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਸੰਭਾਵਿਤ ਅੰਤਰ-ਦੂਸ਼ਣ ਦਾ ਕੋਈ ਸੰਕੇਤ ਨਹੀਂ ਹੈ।BDDE ਅਤੇ ਨਵੀਆਂ ਸਿਖਰਾਂ ਦੇ LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਇਕਾਗਰਤਾ ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਸਾਰਣੀ 2 (ਨਮੂਨੇ 1-4) ਅਤੇ ਚਿੱਤਰ 4 ਵਿੱਚ ਆਇਨ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਮ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।
ਨੋਟ: ਨਮੂਨੇ 1-4 ਆਟੋਕਲੇਵਡ BDDE ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਕੱਚੇ ਮਾਲ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦੇ ਹਨ।ਇਹ ਨਮੂਨੇ ਆਟੋਕਲੇਵ ਨਹੀਂ ਸਨ।
ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ: BDDE, 1,4-ਬਿਊਟਾਨੇਡੀਓਲ ਡਿਗਲਾਈਸੀਡਾਇਲ ਈਥਰ;HA, hyaluronic ਐਸਿਡ;LC-MS, ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਅਤੇ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ;MRM, ਮਲਟੀਪਲ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਨਿਗਰਾਨੀ.
ਚਿੱਤਰ 4 HA ਅਤੇ BDDE ਦੇ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਗਏ ਕੱਚੇ ਮਾਲ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਦੇ LC-MS ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਮ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਹੈ।
ਨੋਟ: ਇਹ ਸਭ ਇੱਕੋ ਹੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਅਤੇ ਅਨੁਪਾਤ 'ਤੇ ਮਾਪਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗਰਾਮ ਦੁਆਰਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤੇ ਕੱਚੇ ਮਾਲ ਲਈ ਸੰਖਿਆਵਾਂ ਇਸ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦੀਆਂ ਹਨ: (1) ਪਾਣੀ, (2) 2% HA ਜਲਮਈ ਘੋਲ, (3) 1% NaOH ਜਲਮਈ ਘੋਲ।LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ 203.30/129.10 Da (ਸਕਾਰਾਤਮਕ MRM ਮੋਡ ਵਿੱਚ) ਦੇ ਪੁੰਜ ਪਰਿਵਰਤਨ ਲਈ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ: BDDE, 1,4-ਬਿਊਟਾਨੇਡੀਓਲ ਡਿਗਲਾਈਸੀਡਾਇਲ ਈਥਰ;HA, hyaluronic ਐਸਿਡ;LC-MS, ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਅਤੇ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ;MRM, ਮਲਟੀਪਲ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਨਿਗਰਾਨੀ.
ਨਵੀਆਂ ਸਿਖਰਾਂ ਦੇ ਗਠਨ ਦੀ ਅਗਵਾਈ ਕਰਨ ਵਾਲੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਕਿ ਕ੍ਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਣ ਵਾਲੀਆਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਬੀਡੀਡੀਈ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਏਜੰਟ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਨਵੀਆਂ ਸਿਖਰਾਂ (ਸੰਭਵ ਉਪ-ਉਤਪਾਦਾਂ) ਦੇ ਗਠਨ ਦੀ ਅਗਵਾਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਮਾਪ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਇਹਨਾਂ ਨਿਰਧਾਰਨਾਂ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਅੰਤਿਮ BDDE ਕਰਾਸਲਿੰਕਰ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ, ਜਿਸਨੂੰ ਇੱਕ ਜਲਮਈ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ NaOH (0%, 1%, 0.1%, ਅਤੇ 0.01%) ਦੀਆਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਇਸਦੇ ਬਾਅਦ ਜਾਂ ਆਟੋਕਲੇਵਿੰਗ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ।ਉਹੀ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਲਈ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਉਹੀ ਹੈ ਜੋ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਜਿਵੇਂ ਕਿ "ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਢੰਗ" ਭਾਗ ਵਿੱਚ ਵਰਣਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਪੁੰਜ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦਾ LC-MS ਦੁਆਰਾ 203.30/129.10 Da ਵਿੱਚ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।BDDE ਅਤੇ ਨਵੀਂ ਪੀਕ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਤੀਜੇ ਸਾਰਣੀ 3 ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਏ ਗਏ ਹਨ। ਉਹਨਾਂ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਨਵੀਂ ਚੋਟੀ ਨਹੀਂ ਲੱਭੀ ਗਈ ਜੋ ਆਟੋਕਲੇਵ ਨਹੀਂ ਸਨ, ਘੋਲ ਵਿੱਚ NaOH ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੀ ਪਰਵਾਹ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ (ਨਮੂਨੇ 1-4, ਸਾਰਣੀ 3).ਆਟੋਕਲੇਵਡ ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ, ਨਵੇਂ ਸਿਖਰਾਂ ਨੂੰ ਹੱਲ ਵਿੱਚ NaOH ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਹੀ ਖੋਜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਪੀਕ ਦਾ ਗਠਨ ਘੋਲ ਵਿੱਚ NaOH ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (ਨਮੂਨੇ 5-8, ਸਾਰਣੀ 3) (RRT = 0.79) 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਜਾਪਦਾ ਹੈ।ਚਿੱਤਰ 5 ਇੱਕ ਆਇਨ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਮ ਦੀ ਇੱਕ ਉਦਾਹਰਨ ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ, NAOH ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਜਾਂ ਗੈਰਹਾਜ਼ਰੀ ਵਿੱਚ ਦੋ ਆਟੋਕਲੇਵਡ ਨਮੂਨੇ ਦਿਖਾ ਰਿਹਾ ਹੈ।
ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ: BDDE, 1,4-ਬਿਊਟਾਨੇਡੀਓਲ ਡਿਗਲਾਈਸੀਡਾਇਲ ਈਥਰ;LC-MS, ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਅਤੇ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ;MRM, ਮਲਟੀਪਲ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਨਿਗਰਾਨੀ.
ਨੋਟ: ਚੋਟੀ ਦੇ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਮ: ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ 0.1% NaOH ਜਲਮਈ ਘੋਲ ਅਤੇ ਆਟੋਕਲੇਵਡ (20 ਮਿੰਟ ਲਈ 120°C) ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਹੇਠਲਾ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗਰਾਮ: ਨਮੂਨੇ ਦਾ NaOH ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਪਰ ਉਸੇ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਆਟੋਕਲੇਵ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।203.30/129.10 Da (ਸਕਾਰਾਤਮਕ MRM ਮੋਡ ਵਿੱਚ) ਦੇ ਪੁੰਜ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦਾ LC-MS ਦੁਆਰਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ: BDDE, 1,4-ਬਿਊਟਾਨੇਡੀਓਲ ਡਿਗਲਾਈਸੀਡਾਇਲ ਈਥਰ;LC-MS, ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਅਤੇ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ;MRM, ਮਲਟੀਪਲ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਨਿਗਰਾਨੀ.
ਸਾਰੇ ਆਟੋਕਲੇਵਡ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ, NaOH ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ, BDDE ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਗਿਆ ਸੀ (16.6 ਗੁਣਾ ਤੱਕ) (ਨਮੂਨੇ 5-8, ਸਾਰਣੀ 2)।BDDE ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਇਸ ਤੱਥ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ ਕਿ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨਾਂ 'ਤੇ, ਪਾਣੀ ਇੱਕ 1,2-ਡਾਇਲ ਮਿਸ਼ਰਣ ਬਣਾਉਣ ਲਈ BDDE ਦੇ ਐਪੋਕਸਾਈਡ ਰਿੰਗ ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹਣ ਲਈ ਇੱਕ ਅਧਾਰ (ਨਿਊਕਲੀਓਫਾਈਲ) ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਮੋਨੋਇਸੋਟੋਪਿਕ ਗੁਣਵੱਤਾ BDDE ਤੋਂ ਵੱਖਰੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਲਈ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਹੋਵੇਗੀ।LC-MS ਨੇ 203.30/129.10 Da ਦੀ ਇੱਕ ਮਾਸ ਸ਼ਿਫਟ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਇਆ।
ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਇਹ ਪ੍ਰਯੋਗ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਨਵੀਆਂ ਚੋਟੀਆਂ ਦੀ ਉਤਪੱਤੀ BDDE, NAOH, ਅਤੇ ਆਟੋਕਲੇਵਿੰਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਪਰ HA ਨਾਲ ਕੋਈ ਲੈਣਾ-ਦੇਣਾ ਨਹੀਂ ਹੈ।
ਲਗਪਗ 2.71 ਮਿੰਟਾਂ ਦੇ ਧਾਰਨ ਸਮੇਂ 'ਤੇ ਲੱਭੀ ਗਈ ਨਵੀਂ ਸਿਖਰ ਨੂੰ LC-MS ਦੁਆਰਾ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਸ ਮੰਤਵ ਲਈ, BDDE (9.9 mg/mL) ਨੂੰ 1% NaOH ਜਲਮਈ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਆਟੋਕਲੇਵ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਸਾਰਣੀ 4 ਵਿੱਚ, ਨਵੀਂ ਸਿਖਰ ਦੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਜਾਣੀ ਜਾਂਦੀ ਬੀਡੀਡੀਈ ਸੰਦਰਭ ਸਿਖਰ ਨਾਲ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ (ਰੱਖਣ ਦਾ ਸਮਾਂ ਲਗਭਗ 3.47 ਮਿੰਟ)।ਦੋ ਸ਼ਿਖਰਾਂ ਦੇ ਆਇਨ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟੇਸ਼ਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ, ਇਹ ਸਿੱਟਾ ਕੱਢਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਕਿ 2.72 ਮਿੰਟ ਦੀ ਧਾਰਨਾ ਸਮਾਂ ਵਾਲੀ ਚੋਟੀ ਬੀਡੀਡੀਈ ਚੋਟੀ ਦੇ ਸਮਾਨ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਪਰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਤੀਬਰਤਾਵਾਂ (ਚਿੱਤਰ 6) ਦੇ ਨਾਲ।2.72 ਮਿੰਟ ਦੇ ਧਾਰਨ ਸਮਾਂ (PIS) ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਸਿਖਰ ਲਈ, 147 Da ਦੇ ਪੁੰਜ 'ਤੇ ਵਿਖੰਡਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਇੱਕ ਹੋਰ ਤੀਬਰ ਸਿਖਰ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਸ ਨਿਰਧਾਰਨ ਵਿੱਚ ਵਰਤੀ ਗਈ BDDE ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (9.9 mg/mL) 'ਤੇ, ਅਲਟਰਾਵਾਇਲਟ ਸਪੈਕਟ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਵੱਖੋ-ਵੱਖਰੇ ਸੋਖਣ ਮੋਡ (UV, λ=200 nm) ਵੀ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫਿਕ ਵਿਭਾਜਨ (ਚਿੱਤਰ 7) ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਦੇਖੇ ਗਏ ਸਨ।2.71 ਮਿੰਟ ਦੀ ਧਾਰਨਾ ਸਮਾਂ ਵਾਲੀ ਸਿਖਰ ਅਜੇ ਵੀ 200 nm 'ਤੇ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦੀ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ BDDE ਸਿਖਰ ਨੂੰ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਮ ਵਿੱਚ ਉਸੇ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਦੇਖਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਸਾਰਣੀ 4 ਲਗਭਗ 2.71 ਮਿੰਟ ਦੇ ਧਾਰਨ ਸਮੇਂ ਦੇ ਨਾਲ ਨਵੀਂ ਸਿਖਰ ਦੇ ਗੁਣਾਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਅਤੇ 3.47 ਮਿੰਟ ਦੇ ਧਾਰਨ ਸਮੇਂ ਦੇ ਨਾਲ BDDE ਸਿਖਰ
ਨੋਟ: ਇਹਨਾਂ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ, LC-MS ਅਤੇ HPLC ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ (MRM ਅਤੇ PIS) ਦੋ ਸਿਖਰਾਂ 'ਤੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।HPLC ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ, 200 nm ਦੀ ਤਰੰਗ-ਲੰਬਾਈ ਦੇ ਨਾਲ UV ਖੋਜ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ: BDDE, 1,4-ਬਿਊਟਾਨੇਡੀਓਲ ਡਿਗਲਾਈਸੀਡਾਇਲ ਈਥਰ;HPLC, ਉੱਚ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ;LC-MS, ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਅਤੇ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ;MRM, ਮਲਟੀਪਲ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਨਿਗਰਾਨੀ;m/z, ਪੁੰਜ-ਤੋਂ-ਚਾਰਜ ਅਨੁਪਾਤ;PIS, ਉਤਪਾਦ ਆਇਨ ਸਕੈਨਿੰਗ;ਅਲਟਰਾਵਾਇਲਟ ਰੋਸ਼ਨੀ, ਅਲਟਰਾਵਾਇਲਟ ਰੋਸ਼ਨੀ.
ਨੋਟ: ਪੁੰਜ ਦੇ ਟੁਕੜੇ LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ (PIS) ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਸਿਖਰ ਦਾ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗਰਾਮ: BDDE ਸਟੈਂਡਰਡ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦਾ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰਮ।ਹੇਠਲਾ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗਰਾਮ: ਖੋਜੀ ਗਈ ਨਵੀਂ ਸਿਖਰ ਦਾ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰਮ (BDDE ਪੀਕ ਨਾਲ ਸਬੰਧਿਤ RRT 0.79 ਹੈ)।BDDE ਨੂੰ 1% NaOH ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਸੰਸਾਧਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਆਟੋਕਲੇਵ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ: BDDE, 1,4-ਬਿਊਟਾਨੇਡੀਓਲ ਡਿਗਲਾਈਸੀਡਾਇਲ ਈਥਰ;LC-MS, ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਅਤੇ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ;MRM, ਮਲਟੀਪਲ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਨਿਗਰਾਨੀ;PIS, ਉਤਪਾਦ ਆਇਨ ਸਕੈਨ;RRT, ਰਿਸ਼ਤੇਦਾਰ ਧਾਰਨ ਸਮਾਂ।
ਚਿੱਤਰ 7 203.30 Da ਪੂਰਵ-ਸੂਚਕ ਆਇਨ ਦਾ ਆਇਨ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗਰਾਮ, ਅਤੇ (A) 2.71 ਮਿੰਟ ਦੇ ਧਾਰਨ ਸਮੇਂ ਦੇ ਨਾਲ ਨਵੀਂ ਸਿਖਰ ਅਤੇ (B) 200 nm 'ਤੇ 3.46 ਮਿੰਟ 'ਤੇ BDDE ਸੰਦਰਭ ਸਟੈਂਡਰਡ ਪੀਕ ਦੀ UV ਖੋਜ।
ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਾਰੇ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲਜ਼ ਵਿੱਚ, ਇਹ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਕਿ LC-MS ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦੇ ਬਾਅਦ ਬਾਕੀ ਬਚੀ BDDE ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ <2 ppm ਸੀ, ਪਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਅਣਜਾਣ ਸਿਖਰ ਦਿਖਾਈ ਦਿੱਤੀ।ਇਹ ਨਵੀਂ ਸਿਖਰ BDDE ਮਿਆਰੀ ਉਤਪਾਦ ਨਾਲ ਮੇਲ ਨਹੀਂ ਖਾਂਦੀ ਹੈ।BDDE ਸਟੈਂਡਰਡ ਉਤਪਾਦ ਨੇ ਵੀ ਸਕਾਰਾਤਮਕ MRM ਮੋਡ ਵਿੱਚ ਸਮਾਨ ਗੁਣਵੱਤਾ ਪਰਿਵਰਤਨ (MRM ਪਰਿਵਰਤਨ 203.30/129.10 Da) ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਹੈ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਹੋਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਤਮਕ ਢੰਗਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਨੂੰ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਲ ਵਿੱਚ ਬੀਡੀਡੀਈ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਸੀਮਾ ਟੈਸਟਾਂ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਅਧਿਕਤਮ ਖੋਜ ਸੀਮਾ (LOD) 2 ਪੀਪੀਐਮ ਤੋਂ ਥੋੜ੍ਹਾ ਘੱਟ ਹੈ।ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, ਹੁਣ ਤੱਕ, NMR ਅਤੇ MS ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ HA ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੇ ਸ਼ੂਗਰ ਯੂਨਿਟ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ HA ਦੇ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਅਤੇ/ਜਾਂ ਸੋਧ ਦੀ ਡਿਗਰੀ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ।ਇਹਨਾਂ ਤਕਨੀਕਾਂ ਦਾ ਉਦੇਸ਼ ਕਦੇ ਵੀ ਇੰਨੀ ਘੱਟ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਬਕਾਇਆ BDDE ਖੋਜ ਨੂੰ ਮਾਪਣਾ ਨਹੀਂ ਸੀ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਅਸੀਂ ਇਸ ਲੇਖ ਵਿੱਚ ਵਰਣਨ ਕੀਤਾ ਹੈ (ਸਾਡੀ LC-MS ਵਿਧੀ ਦਾ LOD = 10 ppb)।
ਪੋਸਟ ਟਾਈਮ: ਸਤੰਬਰ-01-2021